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“大風(fēng)起兮云飛揚(yáng)，蒼天佑我效率強(qiáng)”，以前上學(xué)的時(shí)候，每每提取RNA之前，都要默念幾遍（我太難了）。RNA提取怕是所有分子實(shí)驗(yàn)室的必備的技能了，但是提取的效果可能經(jīng)常會(huì)有些不盡人意，忽好忽壞。

今天我們就來(lái)說(shuō)說(shuō)提取RNA被降解的那些事兒。

RNA樣品特別容易受到環(huán)境因素影響，組織取出后沒(méi)有馬上處理或冷凍；待提取rna的樣品沒(méi)有保存于-60至-70℃，而保存在了-5至-20℃；細(xì)胞在用胰酶處理時(shí)過(guò)度；溶液或離心管未經(jīng)Rnase去除處理，這些都會(huì)導(dǎo)致辛苦提出的RNA被降解，特別是大名鼎鼎的RNA酶 （RNase），通常我們?nèi)蔽溲b、小心翼翼，但還是會(huì)受到RNA酶的降解，核糖核酸酶（RNase）或稱(chēng)RNA酶，是一種可將RNA水解成小分子組成的核酸酶。RNase作為一個(gè)小分子的蛋白，卻異常的穩(wěn)定。常規(guī)的高溫高壓蒸汽滅菌和蛋白抑制劑都不能使它完全失活，聽(tīng)著就很頑固。

除了具有極佳的穩(wěn)定性，RNA酶在實(shí)驗(yàn)室無(wú)處不在。它是生物的一種防御機(jī)制，對(duì)于一個(gè)細(xì)胞來(lái)說(shuō)外源性的RNA往往是致命的，相比于外源性的DNA，外源性的RNA往往更加危險(xiǎn)，一不注意外源性的RNA就愉快的轉(zhuǎn)錄翻譯了，所以幾乎所有的生物都進(jìn)化出了RNA酶用來(lái)防御外源性RNA的入侵。因此實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的細(xì)菌細(xì)胞以及提取RNA的你都散發(fā)著RNA酶的香氣，人類(lèi)的體液（唾液、眼淚等）甚至手指中都含有大量的RNA酶，所以操作時(shí)要戴好口罩，盡量避免與人交談，還要做到勤換手套。

其次，操作時(shí)使用的儀器、耗材，包括槍頭、離心管、移液器也要確保是無(wú)RNA酶的，剛剛說(shuō)了單純的滅菌是不能滅活RNase的，所以槍頭和離心管要用DEPC處理，也就是說(shuō)使用表明是DEPC處理的產(chǎn)品。移液器最好是有一套專(zhuān)用的，使用之前用75%的酒精擦拭干凈，尤其是桿子。使用的水、緩沖劑要確保無(wú)RNA酶，使用的實(shí)驗(yàn)臺(tái)面最起碼要用75%的酒精擦拭，反正就是你實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所用到的各種儀器設(shè)備，你都要對(duì)它了如指掌。

樣本選擇時(shí)一定要選取新鮮的樣本組織或者取樣后迅速低溫處理（液氮速凍）；樣本出現(xiàn)多次反復(fù)凍融后，RNA得率會(huì)嚴(yán)重下降，也會(huì)導(dǎo)致RNA降解；對(duì)于血液樣本，如果樣本中含有血塊，說(shuō)明樣本收集時(shí)未加入血液抗凝劑；建議重新收集樣本并加入EDTA，肝素，檸檬酸等抗凝劑；

最后歸納一下：低溫是關(guān)鍵，耗材處理好，全副武裝少說(shuō)話(huà)！

祝大家提的RNA濃度高，純度好，實(shí)驗(yàn)順順利利。