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【產(chǎn)品名稱(chēng)】
通用名稱(chēng)：犬巴貝斯蟲(chóng)（Bab）核酸檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）
Name：Babesia Canis Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包裝規(guī)格】10T/盒
【預(yù)期用途】
巴貝斯蟲(chóng)病是一種蜱傳性的血液原蟲(chóng)病，該病由寄生于紅細(xì)胞內(nèi)的多種巴貝斯蟲(chóng)引起，其臨床特征為發(fā)熱、精神沉郁、嗜睡、黃疸、貧血、血紅蛋白尿、嘔吐、呼吸困難等，對(duì)犬的健康造成了巨大的危害。[1-2]
本試劑盒適用于檢測(cè)血液中的犬巴貝斯蟲(chóng)，用于犬巴貝斯蟲(chóng)感染的輔助診斷。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用TaqMan探針?lè)▽?shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，設(shè)計(jì)一對(duì)犬巴貝斯蟲(chóng)基因組特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光PCR技術(shù)對(duì)犬巴貝斯蟲(chóng)基因組的DNA進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。
【試劑組成】
|
包裝規(guī)格 |
25T/盒 |
50T/盒 |
|
Bab反應(yīng)液 |
500μL×1管 |
500μL×2管 |
|
酶液 |
25μL×1管 |
50μL×1管 |
|
Bab陽(yáng)性質(zhì)控品 |
50μL ×1管 |
50μL ×1管 |
|
陰性質(zhì)控品 |
250μL ×1管 |
250μL ×1管 |
說(shuō)明：不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。
【儲(chǔ)存條件及有效期】-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過(guò)5次，有效期12個(gè)月。
【適用儀器】ABI 、安捷倫MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列熒光定量PCR檢測(cè)儀。
【標(biāo)本采集】無(wú)菌注射器抽取血液3~5mL至EDTA-2Na抗凝管
【保存和運(yùn)輸】
上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-70℃，但不能超過(guò)6個(gè)月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用2~8℃冰袋運(yùn)輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。
【使用方法】
1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）
1.1 樣本前處理
組織樣品：每份組織分別從3個(gè)不同的位置稱(chēng)取樣品約1g，手術(shù)剪剪碎混勻后取0.5g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中；咽拭子樣品直接取100μL于1.5mL滅菌離心管中。
1.2 核酸提取
推薦采用廣州維伯鑫生物科技股份有限公司生產(chǎn)的核酸提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進(jìn)行核酸提取，請(qǐng)按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。
2. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照；樣品每滿10份，多配制1份)，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
|
試劑 |
Bab反應(yīng)液 |
酶液 |
|
用量（樣本數(shù)為N） |
20μL |
1μL |
將混合好的測(cè)試反應(yīng)液分裝到PCR反應(yīng)管中，21uL/管。
3. 加樣（樣本處理區(qū)）
將步驟1提取的核酸、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
4. PCR擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）
4.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量PCR儀反應(yīng)槽內(nèi)；
4.2 設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為25μL；
熒光通道選擇： 檢測(cè)通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI系列儀器請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光，選擇None即可。
4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：
|
步驟 |
循環(huán)數(shù) |
溫度 |
時(shí)間 |
收集熒光信號(hào) |
|
1 |
1 cycle |
95℃ |
10min |
否 |
|
2 |
40 cycles |
94℃ |
15sec |
否 |
|
55℃ |
30sec |
是 |
【注意事項(xiàng)】
1.所有操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行；
2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，完全混勻并短暫離心；
3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存；
4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；
5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專(zhuān)用工作服；
6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行，以免交叉污染；
7.實(shí)驗(yàn)完畢后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器；
8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。
【參考文獻(xiàn)】
[1]李蓓蓓.犬巴貝斯蟲(chóng)病的診斷與預(yù)防[J].今日畜牧獸醫(yī),2019,35(03):99.
[2]陜西省部分寵物醫(yī)院犬巴貝斯蟲(chóng)病流行情況及病原鑒定[D]. 唐歡.西北農(nóng)林科技大學(xué)，2019.
【生產(chǎn)企業(yè)】
企業(yè)名稱(chēng)：廣州維伯鑫生物科技股份有限公司 郵 編：510663
生產(chǎn)地址：廣州高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開(kāi)發(fā)區(qū)科學(xué)城科豐路31號(hào)G11棟201號(hào)
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